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本報(bào)訊（記者　顧泳）記者近日獲悉：復(fù)旦大學(xué)上海醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)分子病毒學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室袁正宏課題組、市公共衛(wèi)生臨床中心科研人員等合力攻關(guān)，通過長期研究，揭示了乙肝長期遷延不愈的根本原因，同時(shí)監(jiān)測到慢性乙肝抗病毒治療后cccDNA清除情況。相關(guān)研究在線發(fā)表在國際期刊上。

乙肝病毒是嚴(yán)重影響人類健康的病原體，它是造成慢性乙肝的元兇。世界衛(wèi)生組織2015年的研究估計(jì)，全球約有2.4億慢性乙肝患者，大多分布在低收入、中等收入國家。每年約有65萬人死于慢性乙肝感染所致的肝衰竭、肝硬化、肝細(xì)胞癌。我國現(xiàn)有慢性乙肝感染者9300萬人，在肝硬化、肝細(xì)胞癌患者中，由乙肝病毒引起的比例分別高達(dá)60%、80%。隨著我國乙肝疫苗接種的推行，嬰幼兒乙肝陽性率大幅降低。但對其他感染病毒者，仍缺乏徹底治愈方法，為家庭造成沉重的經(jīng)濟(jì)和健康負(fù)擔(dān)。

論文第一作者、市公衛(wèi)中心科學(xué)研究部博士張小楠介紹，大量臨床與基礎(chǔ)研究表明，慢性乙肝長期遷延不愈，根本原因在于乙肝病毒共價(jià)閉合環(huán)狀DNA（簡稱cccDNA）在肝內(nèi)長期存在，繼而導(dǎo)致病毒表面抗原血癥。由于cccDNA在患者體內(nèi)水平極低，傳統(tǒng)的分子生物學(xué)方法不僅檢測困難，而且無法顯示其組織內(nèi)的分布特點(diǎn)。

在袁正宏指導(dǎo)下，張小楠在bDNA信號擴(kuò)增技術(shù)基礎(chǔ)上二次開發(fā)，成功建立了一種能在組織水平顯示cccDNA分布的原位雜交技術(shù)。該技術(shù)同時(shí)可顯示乙肝病毒的其他復(fù)制中間體。研究組將原位雜交、乙肝病毒主要抗原的免疫組織化學(xué)染色結(jié)合，獲得了病毒核酸與蛋白質(zhì)的綜合圖像。令人意外的是，乙肝病毒抗原與核酸在單細(xì)胞水平均呈現(xiàn)驚人的“馬賽克狀”分布，即病毒的cccDNA。研究進(jìn)一步證實(shí)，經(jīng)過1年以上抗病毒治療的患者，肝細(xì)胞內(nèi)仍存在乙肝病毒cccDNA。

研究組于是提出：在單細(xì)胞水平乙肝病毒存在“抗原富集期”“DNA富集期”和“潛伏期”的三階段假說，推測患者體內(nèi)肝細(xì)胞生理水平、病毒復(fù)制活躍度的變化可以導(dǎo)致三個(gè)階段的相互轉(zhuǎn)換。這一假說在單細(xì)胞水平描述了病毒生活周期的復(fù)雜變化模式，為進(jìn)一步針對患者不同病情設(shè)計(jì)清除乙肝病毒cccDNA提供理論基礎(chǔ)。

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